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分離度計算公式:
N:柱效(Efficiency)反映色譜柱性能,柱效越高,分離度越好。在其他條件恒定的情況下,塔板數(shù)增加一倍,分離度僅提高40%。操作中,可通過下面兩種方式增加塔板數(shù)進而提高分離度:其一,使用長柱或雙柱串聯(lián),但也會使分離時間大大延長;其二,使用細粒徑填料的色譜柱,但這需要耐更高壓力的液相色譜系統(tǒng)。相比之下后者更為可取。
α:選擇性(selectivity)是指色譜柱-流動相體系分離兩個化合物的能力。選擇性主要與固定相、流動相組成以及柱溫等因素有關,與保留值也密切相關,其中固定相和流動相組成影響較大。以zui常見的反相模式為例,反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用對化合物進行保留的,不同化合物的分離是基于它們在鍵合相與流動相中分配系數(shù)的差異,如果兩種化合物的水溶性、在烷烴-水體系的分配系數(shù)等方面存在明顯差異,那么這些化合物通常是能夠利用反相柱達到分離;PH柱對具有苯環(huán)的化合物具有特殊保留。正相模式下,硅膠柱、胺基柱、氰基柱與帶有極性基團的化合物之間存在極性相互作用,對化合物的基團具有選擇性,常常用于結構類似物、異構體化合物的分離。流動相方面,降低流動相的洗脫強度通常可以增大分離度;而有機溶劑類型也會影響分離,比如反相條件下,乙腈和甲醇的選擇性就存在很大差異,這種差異需要在實踐中摸索,但無論如何,多種溶劑類型帶給我們更多的實現(xiàn)分離的可能。
k:隨著容量因子k的增大,分離度也隨之增加,這種影響在k值較低時非常明顯,當k值大于10時,k值增加對分離度的影響就不再顯著,這就告誡無原則地提高k值以增大分離度是沒有意義的。增加鍵合相密度能夠提高k值;另外改變鍵合基團類型也能改變k值,比如在反相色譜中,隨著鍵合相碳鏈長度的增加,k值逐漸增大。
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